Trealamh Braite Aigéad Núicléach Nua Coronavirus (SARS-Cov-2).
New Córónavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Fluméinescent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Trealamh Braite Aigéad Núicléach Coronavirus (SARS-Cov-2) (Modh Taiscéalaithe Fluaraiseacha RT-PCR)
【Packaging specifications 】25 Triail/Feisteas
【Intended usaois】
Úsáidtear an trealamh seo chun aigéad núicléach ó choróinvíreas nua a bhrath go cáilíochtúil i táithíní nasopharyngeal, táithíní oropharyngeal (scornach), táithíní sróine roimhe, táithíní lár-turbinate, nite sróine agus asúpaí sróine ó dhaoine aonair a bhfuil amhras ann go bhfuil COVID19 orthu ag a soláthraí cúram sláinte. Is féidir brath géinte ORF1ab agus N den choróinvíreas nua a úsáid le haghaidh diagnóis chúnta agus monatóireacht eipidéimeolaíoch ar ionfhabhtú nua coronavirus.
【Principles of the prósdure 】
Tá an trealamh seo deartha le haghaidh tóireadóirí ar leith TaqMan agus priméirí sonracha atá deartha le haghaidh na seichimh ghéine nua-coronavirus (SARS-Cov-2) ORF1ab agus N. Cuimsíonn an réiteach imoibrithe PCR 3 thacar de primers ar leith agus taiscéalaithe fluaraiseacha chun spriocanna a bhrath go sonrach, agus úsáidtear sraith bhreise de phríomadóirí sonracha agus de thaiscéalaithe fluaraiseacha mar rialú caighdeánach inmheánach an trealaimh chun géinte coimeádta tí ingineacha a bhrath.
Is é prionsabal na tástála ná go ndéantar an taiscéalaí fluaraiseachta ar leith a dhíleá agus a dhíghrádú ag gníomhaíocht exonuclease an einsím Taq san imoibriú PCR, ionas go mbeidh an grúpa fluaraiseachta tuairisceora agus an grúpa fluaraiseachta múchta scartha, ionas gur féidir leis an gcóras monatóireachta fluaraiseachta fluaraiseacht a fháil. comhartha, agus ansin Trí éifeacht saibhrithe aimplithe PCR, sroicheann comhartha fluaraiseachta an taiscéalaí luach tairsí socraithe-Ct luach (Tairseach Rothaíochta). I gcás nach bhfuil aon sprioc-amplicón ann, tá grúpa tuairisceoirí an taiscéalaithe gar don ghrúpa múchadh. Ag an am seo, tarlaíonn an t-aistriú fuinnimh athshondais fhluaraiseachta, agus múchtar fluaraiseacht an ghrúpa tuairisceoirí ag an ngrúpa múchadh, ionas nach féidir leis an ionstraim fluaraiseacha PCR an comhartha fluaraiseachta a bhrath.
D'fhonn monatóireacht a dhéanamh ar úsáid imoibrithe le linn na tástála, tá an trealamh feistithe le rialuithe dearfacha agus diúltacha: tá an plasmid athchuingreach spriocshuímh sa rialú dearfach, agus is é an rialú diúltach uisce driogtha, a úsáidtear chun monatóireacht a dhéanamh ar thruailliú comhshaoil. Moltar rialú dearfach agus rialú diúltach a shocrú ag an am céanna nuair a dhéantar tástáil.
【Main compóinnts 】
Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Comhpháirtentanna | |
Name | Specaitheasc | Cainníochtity | Cainníochtity | |
Rialú dearfach | 180 μL/vial | 1 | 1 | Plasmids a tógadh go saorga, Uisce driogtha |
Rialú diúltach | 180 μL/vial | 1 | 1 | Uisce driogtha |
Meascán SARS-Cov-2 | 358.5 μL/vial | 1 | / | Péirí sonracha primer, tóireadóirí fluaraiseacha braite sonracha, dNTPs, , MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Uisce driogtha, etc |
Meascán Einsím | 16.5 μL/vial | 1 | / | Einsímí Taq, transcriptase droim ar ais, einsímí UNG, etc. |
Meascán SARS-Cov-2 (Lyophilised) | 25 tástáil / vial | / | 1 | Péirí sonracha primer, tóireadóirí fluaraiseacha braite ar leith, dNTPanna, einsímí Taq, transcriptase droim ar ais, uisce driogtha, etc. |
Maolán 2x | 375 μL/vial | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, Uisce driogtha, etc. |
Nóta:(1) Ní féidir na comhpháirteanna i mbaisceanna éagsúla a mheascadh nó a idirmhalartú.
(2) Ullmhaigh d'imoibrí féin: Trealamh eastósctha aigéid núicléasaigh.
【Storage conditions agus expiration date 】
For BST-SARS-25:Iompar agus stóráil ag -20 ± 5 ℃ ar feadh i bhfad.
For BST-SARS-DR-25:Iompar ag teocht an tseomra. Stóráil ag -20 ± 5 ℃ ar feadh i bhfad.
Seachain timthriallta reo-leá arís agus arís eile. Socraítear an tréimhse bailíochta go sealadach ar feadh 12 mhí.
Féach ar an lipéad le haghaidh an dáta monaraithe agus úsáide.
Tar éis an chéad oscailt, is féidir an t-imoibrí a stóráil ag -20±5 ° C ar feadh tréimhse nach faide ná 1 mhí nó go dtí deireadh na tréimhse imoibrí, cibé dáta a thagann ar dtús, chun timthriallta reo-leá arís agus arís eile a sheachaint, agus líon na n-imoibrí reo. - níor chóir go mbeadh timthriallta thaw níos mó ná 6 huaire.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
Cineál sampla 1.Applicable: Tuaslagán d'aigéad núicléach eastósctha.
Stóráil agus iompar 2.Sample: Stóráil ag-20 ± 5 ℃ ar feadh 6 mhí. Reo agus leá na samplaí níos mó ná 6 huaire.
【Ttáing metcochall】
1.Nucleic acid extraction
Roghnaigh feiste oiriúnach eastósctha aigéid núicléigh chun aigéad núicléach víreasach a bhaint as, agus lean na treoracha paitinne comhfhreagracha. Moltar úsáid a bhaint as trealamh eastósctha agus íonúcháin aigéid núicléigh arna dtáirgeadh ag Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. nó feiste íonú aigéid núicléacha coibhéiseach.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Bain an SARS-Cov-2 Meascán agus Meascán Einsím , leá go hiomlán ag teocht an tseomra mheascadh go maith le gléas Vortex agus ansin lártheifneoir go hachomair.
(2) Cuireadh Meascán Einsím 16.5uL le 358.5uL SARS-Cov-2 Mix agus measctha go maith é chun an tuaslagán imoibrithe measctha a fháil.
(3) Ullmhaigh feadán octal PCR glan 0.2 mL agus marcáil é le 15uL den tuaslagán imoibrithe measctha thuas in aghaidh an tobair.
(4) Cuir 15 μL de thuaslagán aigéad núicléach íonaithe, an rialú dearfach agus an rialú diúltach, agus clúdaigh an caipín feadán octal go cúramach.
(5) Measc go maith trí inbhéartú bun os cionn, agus lártheifneoir go tapa chun an leacht a chomhchruinniú ag bun an fheadáin.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Cuir Maolán 375ul 2x le SARS-Cov-2 Mix((Lyophilised) chun an meascán imoibrithe a ullmhú Measc go maith trí phíopáil agus ansin lártheifneoir go hachomair. ( Chomh luath agus a bhíonn meascán imoibrithe ullmhaithe, moltar é a stóráil ag -20 ℃ ag stórála fadtéarmach.)
(2) Ullmhaigh feadán octal PCR glan 0.2 mL agus é a mharcáil le 15μL de mheascán imoibrithe in aghaidh an tobair.
(3) Cuir 15μL de thuaslagán aigéad núicléach íonaithe, an rialú dearfach agus an rialú diúltach, agus clúdaigh an caipín feadán octal go cúramach.
(4) Measc go maith trí inbhéartú bun os cionn, agus lártheifneoir go tapa chun an leacht a chomhchruinniú ag bun an fheadáin.
3. PCR amplification (Déan tagairt le do thoil don lámhleabhar uirlisí le haghaidh socruithe oibríochta.)
3. 1 Cuir an PCR 8-feadán isteach sa seomra samplach den ionstraim PCR fluaraiseacha, agus socraigh an sampla atá le tástáil, an rialú dearfach agus an rialú diúltach de réir an ord luchtaithe.
3.2 Cainéal braite fluaraiseachta:
(1) Roghnaíonn géine ORF1ab an cainéal braite FAM (Tuairisceoir: FAM, Quencher: Dada).
(2) Roghnaíonn N ghéin an cainéal braite de VIC (Tuairisceoir: VIC, Quencher: Dada).
(3) Roghnaíonn géine caighdeánach inmheánach an cainéal braite CY5 (Tuairisceoir: CY5, Quencher: Dada).
(4) Socraítear an Tagairt Éighníomhach go ROX.
3.3 Socruithe paraiméadar cláir PCR:
Céim | Teocht ( ℃) | Am | Líon na dtimthriallta | |
1 | Frithghníomh trascríobh droim ar ais | 50 | 15 nóim | 1 |
2 | Gníomhachtú einsím Taq | 95 | 2.5 nóim | 1 |
3 | Gníomhachtú einsím Taq | 93 | 10 s | 43 |
Síneadh annealing agus fáil fhluaraiseacht | 55 | 30 s |
Tar éis é a shocrú, sábháil an comhad agus rith an clár imoibrithe.
4.Results analysis
Tar éis don chlár críochnú, déantar na torthaí a shábháil go huathoibríoch, agus déantar anailís ar an gcuar aimpliúcháin. Socraítear an cuar aimpliúcháin go dtí an tairseach réamhshocraithe ionstraime.
【Explanation of test results 】
1. Bailíocht an turgnaimh a chinneadh: Ba cheart go mbeadh cuar aimpliúcháin tipiciúil ag cainéal rialaithe dearfach FAM, VIC cainéal, agus go bhfuil an luach Ct níos lú ná 34 i gcoitinne, ach d'fhéadfadh sé luainiú mar gheall ar shocruithe tairseacha éagsúla ionstraimí éagsúla. Ba cheart go mbeadh an cainéal rialaithe diúltach FAM, VIC neamh-aimplithe Ct. Comhaontaítear go gcaithfear na ceanglais thuas a chomhlíonadh ag an am céanna, nó tá an tástáil seo neamhbhailí.
2. Breithiúnas toraidh
Cainéal FAM/VIC | Toradh breithiúnais |
Ct<37 | Tá tástáil shamplach dearfach |
37≤Ct<40 | Tá an cuar aimpliúcháin S-chruthach, agus is gá samplaí amhrasacha a athscrúdú; má tá torthaí an athscrúdaithe comhsheasmhach, meastar go bhfuil sé dearfach, nó tá sé diúltach |
Ct≥40 Nó Gan Aimpliú | Tá tástáil shamplach diúltach (nó faoi bhun na teorann íochtair maidir le braite trealaimh) |
Nóta: (1) Má tá an cainéal FAM agus an cainéal VIC araon dearfach ag an am céanna, cinntear go bhfuil an SARS-Cov-2 dearfach.
(2) Má tá cainéal FAM nó cainéal VIC dearfach agus go bhfuil an cainéal eile diúltach, ba cheart an tástáil a athdhéanamh. Má tá sé dearfach ag an am céanna, déanfar é a mheas mar SARS-Cov-2 dearfach, ar shlí eile déanfar é a mheas mar SARS-Cov-2 diúltach.